Roche Romania - PCR in timp real

PCR in timp real

Daca sunteti interesati in conturarea profilului expresiei genice sau in detectia variatiilor genetice, unul din membrii familiei LightCycler® de sisteme de PCR in timp real va va oferi cu siguranta performanta analitica si capacitatea de lucru de care aveti nevoie. Analiza de tip PCR in timp real poate fi executata in 32 de capilare (sistemul LightCycler® cu carusel), microplaci PCR pentru blocuri termice intersanjabile cu 96- sau 484 godeuri (sistemul LightCycler® 480), sau in formatul unic cu 1536 de godeuri (sistemul LightCycler® 1536), toate insotite de o gama larga de isntrumente informatice auxiliare si reactivi gata optimizati.

Lansat recent, Nano este cel mai tanar membru al familiei LightCycler®, completand in mod fericit optiunile de lucru disponibile cu formatul 4 x 8 stripuri (32 locuri), dar fara nici o cedare la flexibilitatea si calitatea oferite. Daca doriti sa il testati pentru 1 saptamana in laboratorul dumneavoastra, scrieti-ne pe adresa http://www.roche.ro/portal/roche_romania/contactpublic sau e-mail: bucharest.biologie_moleculara_cercetare@roche.com, precizand aplicatia*.

(*In anumite conditii, mixurile FastStart si un set de stripuri sunt gratuite in aceasta campanie promotionala)

Pentru mai multe informatii, intrati aici.

LightCyler® Nano

Timp de mai mult de 10 ani, Roche a stabilit in mod repetat standardul pentru competente PCR cu seria de instrumentee LightCycler®, precum si portofoliul extins de determinari, software de analiza si reactivi RT-PCR. Aceasta tehnologie este folosita intens in cuantificarea acizilor nucleici, investigarea expresiei genice si detectia variantelor genetice. NOUL instrument LightCycler® Nano este un cycler de ultima generatie, in format 32 reactii si un program de operare pritenos, PC free. Silentios, compact si avand un sistem optic spectral complet, acest instrument va fi partenerul perfect pentru utilizatorii de PCR in timp real ce folosesc strip-uri de PCR standard si fluorofori detectori obisnuiti.

NOUL LightCycler® Nano va asigura calitate inalta la un pret extrem de accesibil, avand in plus un design chic si rezultate exceptionale la toate aplicatiile majore, inclusiv HRM, la care contribuie major design-ul sau solid-state integrat.

Instrumentul beneficiaza de reactivi optimizati pentru toate aplicatiile (cuantificare relativa si absoluta, analiza curbelor de topire, genotipare – discriminare alelica, scanare de mutatii prin HRM). Va invitam sa vedeti oferta noastra promotionala aici

Sistemele cu carusel LightCycler® 2.0

Ciclizare ultra-rapida. Cu un design inovativ, instrumentele LightCycler® 2.0 si produc rezultate in timp semnificativ mai scurt fata de alte metode PCR, prin folosirea incalzirii si racirii cu aer. Aerul din ambient este aspirat de un ventilator mic in camera de reactie, si incalzit prin intermediul unei spirale termice. Datorita capacitatii termice extrem de scazute a aerului, instrumentul poate atinge o rampa de aproximativ 20°C/secunda, de aproape 10 ori mai rapid decat oricare thermal cycler conventional. Reactia PCR se desfasoara in capilare de sticla cu design special, avand un raport optim suprafata / volum. Un ciclu de amplificare obisnuit are loc in 30-60 secunde, iar o reactie de amplificare cu 30 de cicluri se poate termina in 30 de minute. Capilarele (20 μl si 100 μl) sunt bine etansate pentru evitarea contaminarii. Capilarele standard de 20 μl pot fi folosite cu ambele sisteme cu carusel, LightCycler® 1.5 si 2.0. Capilarele de 100 μl sunt exclusiv destinate sistemului LightCycler® 2.0, crescand flexibilitatea experimentelor dumneavoastra. O serie de lucru poate consta in maxim 32 de probe, ce vor fi asezate pe un carusel rotativ in incinta instrumentului, si plasate precis in vederea masurarii pe rand, in punctul focal al unitatii optice.
Sursa de excitatie. Este reprezentata de un LED albastru cu viata lunga, parte integranta a fluorometrului, ce emite la 470 nm si nu necesita nici un fel de mentenanta. Datorita sistemului optic de mare calitate, sursei de excitatie specializata, filtrelor disponibile si a capilarelor de sticla, masuratorile sunt extrem de sensibile si rapide (20 milisecunde). LightCycler® 1.5 poseda un fotometru cu trei canale ce masoara fluorescenta la 530, 640 si 705 nm. LightCycler® 2.0 poseda un fotometru cu sase canale ce masoara fluorescenta la 530, 560, 610, 640, 670 si 705 nm.
Domeniul dinamic. Instrumentele LightCycler® cu carusel lucreaza pe un domeniu dinamic cuprins intre 10 si 10¹⁰ copii in aceeasi serie de lucru, cu o relatie liniara intre unitatile de fluorescenta si concentratia probelor, pe tot domeniul dinamic mentionat.
Sensibilitatea. Sensibilitatea unui experiment cu LightCycler® cu carusel depinde de mai multi factori comuni tuturor reactiilor PCR (calitatea tintei ADN sau ARN, designul primerilor, conditiile de reactie). In conditii optimizate, PCR poate detecta o singura copie genica din 3 pg ADN genomic uman (echivalentul a ~1 genom uman), concentratie la care sensibilitatea si reproductibilitatea determinarii sunt statistic supuse variatiilor. In conformitate cu distributia Poisson, probabilitatea ca tinta sa fie prezenta intr-o proba data este de ~67%. Alte tipuri de ADN, cum sunt cel plasmidian, sunt detectabile atunci cand proba contine 1 – 10 copii.
Reproductibilitatea. Este determinata de capacitatea instrumentului de a distinge intre diferite concentratii de pornire. LightCycler® cu carusel pot determina concentratiile de pornire cu rezolutie foarte mare, iar variabilitatea de la o proba la alta este foarte scazuta. Aceasta performanta este datorata, pe de o parte, rotirii continue a caruselului cu probe in interiorul incintei termice (ce asigura conditii identice de reactie pentru toate probele), iar pe de alta parte unitatii optice (ce asigura masuratori identice pentru toate probele).
Formaturi de detectie. Instrumentele LightCycler® cu carusel sunt compatibile cu foarte multe formaturi de detectie: sonde Universal ProbeLibrary, SYBR Green I, sonde de hibridizare HybProbe si sonde SimpleProbe.
Aplicatii. Precizia maxima la ciclizarea termica, programul software pentru cuantificare - de ultima generatie si gama larga de truse si reactivi disponibila, fac ca LightCycler® cu carusel sa fie ideale pentru o varietate de aplicatii mono-, bicromatice, sau multiplex: expresie genica, validare microarrays, sau blocare genica (tip knock-down sau silencing), dar si pentru analize specifice ale unor parametri de cercetare in oncologie si virusologie. De asemenea, aceste sisteme permit cuantificarea precisa si reproductibila a acizilor nucleici, detectia calitativa simpla si exacta a produsilor PCR, identificarea fara dubii si caracterizarea ampliconilor prin analiza punctelor de topire, precum si genotiparea SNP (Single Nucleotide Polymorphism).

Sistemele cu bloc solid LightCycler® 480 si 1536

LightCycler® 480 si 1536 reprezinta sisteme cu bloc solid de reactie, de a doua generatie, ce introduc programe noi, cu capacitate de analiza extinsa.

Pregatiti mai repede si mai usor experimentele cu ajutorul noului editor de probe.
Programati experimentele prin doar cateva clicuri, avand optiunea de a distila mai tarziu rezultatele obtinute.
Beneficiati de matritele imbunatatite si tabele macro preformante, pentru toate aplicatiile.
Executati genotipari endpoint sau pe baza analizei curbelor de topire.
Folositi metode simple si avansate pentru expresie genica si genotipare.

Sistemul LightCycler® 480

Este o platforma de PCR in timp real complet integrata, cu bloc solid (si microplaci) de reactie, caracterizata prin precizie mare, capacitate crescuta de lucru, compatibilitate cu echipamentele automate si flexibilitate maxima – atat a componentelor fizice, cat si a programului asociat. De asemenea, LightCycler 480 este un sistem compact si versatil, incluzand o unitate de ciclizare termica tip bloc de argint, intersanjabila. Utilizatorii pot folosi microplaci albe sau transparente, in functie de aplicatia dorita.

Beneficiile sistemului

VITEZA SI ACURATETE prin tehnologia de ciclizare termica de omogenitate si reproductibilitate remarcabile, metoda de preluare a datelor, gama larga de reactivi gata optimizati, si analiza directa a datelor brute, prin eliminarea necesitatii normalizarii cu fluorofori de referinta.
VERSATILITATE SI COMODITATE prin posibilitatea de a lucra in format 96 sau 384, fara recalibrarea sistemului, formaturi de testare / detectie numeroase, interfata prietenoasa cu programul de operare si analiza.
COMPATIBILITATE SI SECURITATE prin integrarea ca parte a LIMS si in combinatie cu pipetarea si incarcarea robotica a microplacilor, metode simple si avansate de analiza, protectia datelor prin sistemul optional de complianta 21 CFR part 11.

Blocul de reactie

Pentru atingerea unor performante in format de 96- sau 384-godeuri, similare sistemului cu capilare, LightCycler® 480 integreaza un nou bloc termic de reactie, in care incalzirea / racirea sunt obtinute prin elemente Peltier, iar transferul omogen la toate probele din microplaca - prin noua tehnologie Therma-Base. Unitatea Therma-Base este localizata sub elementele Peltier si asigura uniformitatea de la godeu la godeu, precum si reproductibilitatea maxima intre godeuri. Performantele inalte ale blocului termic de argint permit terminarea unei reactii in 40 de minute. Omogenitatea temperaturii este o conditie absolut necesara la analiza curbelor de topire, sistemul realizand aceeasi temperatura in cursul procesului de topire, simultan in toate godeurile.

Sistemul optic

Performantele excelente ale sistemului optic al LightCycler 480® au ca sursa lampa Xenon de mare intensitate, ce emite lumina intr-un spectru larg, dar si combinatia flexibila de filtre de excitatie / emisie incorporate, ce permit o serie de aplicatii pe baza mai multor formaturi de detectie. Astfel, beneficiati de flexibilitate maxima la alegerea fluoroforilor si a formaturilor de detectie pentru toate aplicatiile de PCR curente, captura precisa a datelor din intreaga microplaca si un filtru nou de banda lunga (detectie la 705 nm). In plus, aveti la dispozitie o capacitate crescuta multiplex pentru sonde de hidroliza 4-plex si HybProbe 3-plex, cu matrite predefinite. Performantele optime ale determinarilor bicolore cu sonde de hidroliza sunt sustinute de “universal color compensation object” pentru combinatia FAM / VIC, sau pentru determinarile bicolore folosind Universal ProbeLibrary.

Formaturi de detectie

Prin alegerea mai multor combinatii de filtre pentru excitatie si emisie se poate obtine excitatia optimizata ca si reducerea suprapunerilor dintre diversi coloranti din amestecul de reactie. Filtrele sunt asezate pe 2 carusele de filtre oferind 5 lungimi de unda de excitatie (440, 465, 498, 533, si 618 nm) si sase de detectie (488, 510, 580, 610, 640, si 660 nm) ce pot fi combinate liber, in functie de cerinte.

Format de detectie / Determinare	Fluorofor	Excitatie (nm)	Detectie (nm)
SYBR Green l	SYBR Green l	465	510
Sonde de hidroliza / Sonde UPL Monocolor	FAM	465	510
Sonde de hidroliza / Sonde UPL Bicolor	FAM VIC / Hex / Yellow 555	465 533	510 580
Sonde de hidroliza 3 culori	FAM VIC / Hex Cy 5 / Cy 5.5	465 533 618	510 580 660
Sonde de hidroliza 4 culori	LightCycler® Cyan 500 FAM LightCycler® Red 610 Cy 5 / Cy 5.5	440 498 533 618	488 580 610 660
Sonde HybProbe Monocolor	Fluoresceina (Donor) LightCycler® Red 640	498	640
Sonde HybProbe Multicolor	Fluoresceina (Donor) LightCycler® Red 610 LightCycler® Red 640 Cy 5 / Cy 5.5	465 498 498 498	510 610 640 660

Software

LightCycler® 480 Software, versiunea 1.5 pune la dispozitie toate functiile necesare rularii aplicatiilor de PCR in timp real, cum sunt programarea protocoalelor de lucru, editarea probelor, a matritelor (templates) si a metodelor de analiza (macro). In plus, LightCycler® 480 Software, versiunea 1.5 permite diferite capacitati de analiza pentru caracterizarea produsilor PCR (SYBR Green I, T_m calling), cuantificarea (absoluta si relativa) a genelor si genotiparea (end-point sau pe baza curbelor de topire).
LightCycler® 480 Gene Scanning Software este un modul accesoriu, bazat pe un algoritm propriu pentru gruparea curbelor de topire dupa forma. Gruparea se poate efectua automat, sau prin includerea ca referinta a probelor standard cu secvente cunoscute. Inainte sa se execute gruparea, datele brute sunt prelucrate in 3 etape: normalizarea, temperature-shifting (alinierea temperaturilor normalizate) si reprezentarea grafica a diferentelor.
LightCycler® 480 Multiple Plate Analysis Software este un modul accesoriu pentru analiza simultana a rezultatelor mai multor microplaci, atat pentru cuantificare genica, cat si pentru genotipari.

LightCycler® 480 Control Kit

O trusa pentru controlul performantelor de reactie si demonstrarea analizei cantitative de PCR in timp real si a curbelor de topire realizate cu instrumentul LightCycler® 480.

Aplicatii*

Peste 5 milioane de determinari in timp real pentru o varietate larga de organisme sunt posibile cu doar 165 sonde Universal ProbeLibrary. Ca noutate, beneficiati de determinarile proiectate special sa indeplineasca specificatiile dumneavoastra, folosind RealTime Ready. O alta noutate o constituie panelurile gata de utilizare, ce contin seturi de primeri pentru microARN, pre-portionate in placi cu 384 de godeuri, de la Exiqon, miRCURY LNA™ Universal RT microRNA PCR.

* In aceasta sectiune sunt mentionate numai aplicatii speciale. Pentru gama completa de reactivi, va rugam sa consultati sectiunea Reactivi pentru genomica

RealTime Ready. Produsele personalizate RealTime Ready va permit cuantificarea rapida si flexibila a nivelurilor de expresie genica de interes. Selectati si comandati determinari singulare Custom Assays vizand orice tinta umana, sau configurati-va propriul panel Custom Panel care sa contina determinarea dorita, folosind gratuit RealTime ready Configurator online sau, in cel mai simplu mod, aveti incredere in RealTime ready Focus Panels gata configurate, ce includ o selectie bogata de gene din cai celulare specifice, sau grupari functionale.

miRCURY LNA™ Universal RT microRNA PCR. Un sistem unic pentru profilarea microARN, miRCURY LNA™ Universal RT microRNA PCR de la Exiqon ofera combinatia ideala de performanta si comoditate, prin cele doua trasaturi importante: (i) RT universala – o singura reactie de sinteza a primei catene de ADNc (sau reactie RT) poate fi folosita ca matrita pentru mai multe determinari de microARN prin PCR in timp real, reducand timpul de lucru si variatiile tehnice; (ii) amplificarea LNA™ PCR – atat primerii (sens si antisens) sunt specifici pentru microARN si optimizati cu LNA™, pentru sensibilitate inalta si fundal scazut, precum si pentru o specificitate adecvata diferentierii speciilor strans inrudite de microARN. Va invitam sa vizitati www.exiqon.com/mirna-pcr pentru a afla mai multe amanunte.

Sensibilitate inegalabila – determinati profilul a 742 microARN folosind numai 40ng de ARN total, fara pre-amplificare
Cantitate redusa de ARN introdusa in reactie - Ideal pentru probe cum sunt ser/plasma, sectiuni incluse in parafina sau sectiuni LCM (laser capture microdissection)
Rapid si usor de folosit – nu trebuie decat sa adaugati un amestec de ADNc si SYBR Green master mix in placi si sa rulati programul
Performanta de incredere – primeri LNA™ pe deplin validati si optimizati, ce asigura diferentierea microARN strans inrudite, asa cum sunt precursorii de- si speciile de microARN mature
Paneluri gata de utilizare pentru LightCycler® 480, in microplaci cu 384 de godeuri, dar si ca teste individuale.